生物大分子藥物是一類利用現(xiàn)代生物技術(shù)方法生產(chǎn)的源自生物體內(nèi)并被用于疾病的診斷、治療或預(yù)防的生物大分子，狹義上也被稱為生物技術(shù)藥物，如疫苗、抗體藥物，包括單克隆抗體、抗體偶聯(lián)藥物（ADC）、雙特異性抗體、Fc 融合蛋白、抗體片段、多克隆抗體等。與化學(xué)合成藥物相比，生物大分子藥物具有相對(duì)分子量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜、不易透過(guò)生物膜、給藥劑量低和易在體內(nèi)降解等特點(diǎn)。隨著生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，生物大分子藥物已被廣泛用于治療腫瘤、自身免疫性疾病和代謝性疾病等多種疾病。然而因此類藥物生產(chǎn)技術(shù)和本身分子量較大等特點(diǎn)，大分子藥物往往會(huì)出現(xiàn)免疫原（Immunogenicity）。

免疫原性（Immunogenicity）是當(dāng)治療類蛋白產(chǎn)品作為某些疾病的治療藥物時(shí)，被機(jī)體識(shí)別為外來(lái)物質(zhì)（抗原）而產(chǎn)生的免疫應(yīng)答。然而對(duì)于治療性蛋白的這一免疫應(yīng)答往往是不必要或非預(yù)期的，且在此應(yīng)答過(guò)程中可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生抗藥抗體（Anti-drug antibodies，ADAs），包括抗藥抗體、中和抗體、免疫復(fù)合物等，ADA的存在可影響藥物的生物學(xué)活性、藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，甚至使得藥物原有的療效降低或缺失，而當(dāng)有些免疫應(yīng)答與機(jī)體內(nèi)源性蛋白產(chǎn)生交叉免疫反應(yīng)，則可能帶來(lái)嚴(yán)重的臨床安全問(wèn)題。

圖一 免疫原性的影響

正是基于此， 免疫原性的評(píng)估亟需相關(guān)技術(shù)規(guī)范文件予以支持。

2007年歐洲藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)（EMA）的人用藥品委員會(huì) (CHMP) 發(fā)布免疫原性評(píng)估的指導(dǎo)原則但并未對(duì)如何產(chǎn)生相應(yīng)數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)作出詳細(xì)規(guī)定，在2017年EMA發(fā)布了該指導(dǎo)原則的最終版本（Final Version），但仍沒(méi)有出現(xiàn)技術(shù)細(xì)節(jié)上的詳細(xì)規(guī)定，EMA貫徹其適用目的原則（fit to purpose, FTP），要求申辦方選擇最優(yōu)的方法來(lái)響應(yīng)或滿足監(jiān)管要求，具有相對(duì)靈活性。

美國(guó)FDA則于2014年首次發(fā)布了免疫原性評(píng)估指導(dǎo)原則，其中給出免疫原性的影響因素和評(píng)價(jià)策略。并于2019年發(fā)布的免疫原性評(píng)估指導(dǎo)原則《Immunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products —Developing and Validating Assays for Anti-Drug Antibody Detection Guidance for Industry 》中將“免疫原性”定義為治療性蛋白產(chǎn)品對(duì)自身和相關(guān)蛋白產(chǎn)生免疫應(yīng)答或誘發(fā)免疫相關(guān)臨床不良事件的傾向。

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）于2020年08月24日發(fā)布了《藥物免疫原性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見(jiàn)稿）》，并于2021年03月29日發(fā)布正式版本，其總體的評(píng)估策略與FDA相同，與已有的FDA和EMA指導(dǎo)原則有所不同，NMPA正式版則充分考慮到了非臨床和臨床研究中免疫原性檢測(cè)方法的差別。這一指導(dǎo)原則的出臺(tái)，為國(guó)內(nèi)免疫原性相關(guān)研究提供了至關(guān)重要的規(guī)范性指導(dǎo)。

對(duì)于ADA的檢測(cè)，NMPA、FDA、EMA的檢測(cè)決策基本一致，三者均提倡多層級(jí)的評(píng)估策略：

（1）篩選試驗(yàn)：對(duì)所有樣本進(jìn)行，篩選出疑似陽(yáng)性樣品；

（2）確證試驗(yàn)：對(duì)疑似陽(yáng)性樣本進(jìn)行特異性的確證試驗(yàn)，確定陽(yáng)性樣本；

（3）滴度試驗(yàn)：對(duì)已確定抗體陽(yáng)性的樣本進(jìn)行滴度試驗(yàn)，確定陽(yáng)性相對(duì)強(qiáng)弱；功能性試驗(yàn)對(duì)抗體進(jìn)行中和活性檢測(cè)。

圖二 ADA檢測(cè)的分級(jí)評(píng)估策略

圖三 NMPA、FDA、EMA指導(dǎo)原則中驗(yàn)證的內(nèi)容和接受標(biāo)準(zhǔn)異同點(diǎn)

對(duì)于抗藥抗體檢測(cè)針對(duì)不同的檢測(cè)需求和難度可以采用不同的方法和儀器，包含但不局限于：直接法、橋聯(lián)法和均相結(jié)合法等。傳統(tǒng)的檢測(cè)儀器有酶標(biāo)儀、MSD等，目前基于MSD（電化學(xué)發(fā)光） 平臺(tái)的橋接法是ADA檢測(cè)中最經(jīng)典的方法。而在安徽萬(wàn)邦醫(yī)藥分析測(cè)試中心平臺(tái)正擁有此類完善的檢測(cè)設(shè)備和多年的生物分析經(jīng)驗(yàn)，檢測(cè)能力涵蓋藥代動(dòng)力學(xué)(PK)，藥效學(xué)(PD)，抗藥抗體(ADA)，中和抗體(NAb)，和生物標(biāo)志物(Biomarker)檢測(cè)等，可根據(jù)客戶需求提供完善的方法學(xué)開(kāi)發(fā)、驗(yàn)證和生物樣本檢測(cè)服務(wù)，歡迎全國(guó)各地的朋友前來(lái)合作咨詢。

參考資料

［1］《藥物免疫原性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(征求意見(jiàn)稿)》NMPA, 2020.08

［2］《藥物免疫原性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,NMPA, 2021.03. 

［3］Immunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products — Developing and Validating Assays for Anti-Drug Antibody Detection Guidance for Industry, January 2019.

［4］Guide line on Immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic proteins (EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006 Rev 1), 1st Dec 2017.